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甲胎蛋白检测上海液质检测

  • 来源:本站原创
  • 时间:2023/5/11 10:30:39
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年前苏联Abelve发现了可用于诊断原发性肝癌的甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP),其是胚胎性抗原类肿瘤标志物,正常情况下此类胚胎抗原仅出现于胚胎期,出生后呈现低表达或不表达,AFP分为肝型和卵*囊型,这两种AFP对刀豆素(ConA)和小扁豆凝集素(LCA)等凝集素的结合能力不同。LCA同时能与肿瘤来源的肝型和卵*囊型AFP结合,AFP按照其与LCA亲和力大小分为AFP-LlAFP-口和AFP-口三种异质体。其中AFP-Ll主要存在于良性肝脏疾病,AFP-l2多由卵*囊肿瘤产生,亦可见于孕妇血清中,AFP-L3为肝癌细胞所特有,与LCA亲和力最强。

一、检测方法

目前AFP的常用检测方法有I1SA法、化学发光免疫测定(chemiluminescentimmunoassay,的)、电化学发光免疫测定(归elecctrochlerrmlnoasaECLIA)、时间分辨荧光免疫分析法、放射免疫法(RIA)、金标记免疫渗滤法及液相芯片技术。(一)ELISA

采用双抗体夹心模式。在微孔板上包被AFP单克隆抗体,在包被孔中分别加人标准品、阳性、阴性对照和血清标本,反应后加人酶结合物(HRP:-AFP单克隆抗体)使特异性地形成固相抗AFP抗体-AFP-酶标抗AFP抗体复合物。洗去未结合在固相上的反应物,加人底物显色剂,测定OD值,显色程度在一定范围内与AFP含量成正比。

{试剂]试剂组成:包被有抗AFP单克隆抗体的微孔板、一系列浓度的标准品、酶标记的抗体、酶显色底物榕液以及阴性对照、阳性对照、浓缩洗涤液、终止液等。

[操作】按试剂盒使用说明书或实验室制定的SOP进行操作,主要操作流程如下:设定和加载标准品、阴性对照、阳性对照、质控物及待测标本→温育反应→加人酶标记的抗AFP克隆抗体→温育反应→洗涤→加入酶显色底物溶液→温育反应→终止→比色。

【结果计算}

1.酶标仪检测采用单波长(nm)或双波长(nmlnmnm)比色测定,通常选用双波长比色。

2.计算以系列标准品浓度值的对数值为横坐(X轴),以标准品OD值的对数值为纵坐标(Y轴),建立(log-log)标准曲线,计算待测标本的AFP含量。

{参考区间1.正常人AFP含量:$;20.0nglml2.各实验室最好根据本室使用的检测系统,检测一定数量的正常人群,建立自己的参考区间。如用文献或说明书提供的参考区间,使用前应加以验证。




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